凍存盒操作
方法一：使用程序凍存盒
使用程序降溫盒是最-常用的凍存方法。市面上的降溫盒有些需要添加異丙醇，有些則不需要。
降溫盒須恢復(fù)室溫后再使用。
根據(jù)普諾賽實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)，使用程序凍存盒凍存效果良好，沒(méi)有凍存盒的同學(xué)可以參照下文方法二和方法三。
操作步驟
步驟1：配制程序凍存液，放在室溫備用或放在4℃預(yù)冷
步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：用配制好的凍存液重懸細(xì)胞，按照1~1.5mL/管分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟4：凍存管放入凍存盒，凍存盒放入-80℃冰箱過(guò)夜（24h）
步驟5：凍存管從凍存盒取出，轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存
使用凍存盒操作示意圖
▲使用凍存盒操作示意圖
方法二：使用無(wú)血清非程序凍存液
無(wú)血清非程序凍存液是一種商品化的凍存液，無(wú)需自己配制，無(wú)需降溫盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有細(xì)胞都適用于這種凍存液，使用前必須做凍存測(cè)試，沒(méi)問(wèn)題后再批量應(yīng)用。
操作步驟
步驟1：從冰箱拿出無(wú)血清非程序凍存液，待用
步驟2：離心收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來(lái)離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）
步驟3：棄上清，加入適量無(wú)血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞
步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記
步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存
使用無(wú)血清非程序凍存液操作示意圖
▲使用無(wú)血清非程序凍存液操作示意圖
方法三：手動(dòng)梯度降溫

在沒(méi)有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測(cè)試。

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