Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium Iodide staining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析。

碘化丙啶(Propidium Iodide，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。

細(xì)胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。

本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。

本試劑盒足夠檢測50個樣品，每個樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為10-100萬。

產(chǎn)品組成：

使用方法：

1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：細(xì)胞數(shù)量控制在1×10⁵~1×10⁶個。

A．貼壁細(xì)胞：小心吸除細(xì)胞培養(yǎng)液，用胰酶消化細(xì)胞，制備成單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞，棄上清，用1 mL預(yù)冷的PBS潤洗細(xì)胞一次，離心收集細(xì)胞。

B．懸浮細(xì)胞：1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。加入1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心收集細(xì)胞。

C．組織細(xì)胞：將組織塊用剪刀剪成盡量小的小塊后，用0.25%的胰酶消化0.5-1 h，經(jīng)過200-400目篩網(wǎng)過濾得到單細(xì)胞懸液。1000 g離心5 min，沉淀細(xì)胞。加入約1 mL預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞。如組織難以消化，可加入適量膠原酶。

2. 細(xì)胞固定：

細(xì)胞沉淀用1 mL預(yù)冷的70%乙醇輕輕混勻，4℃固定2 h以上或者過夜。然后1000 g左右離心5 min沉淀細(xì)胞后，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的70%乙醇，以避免吸走細(xì)胞。

加入1 mL預(yù)冷的PBS重懸。然后再次1000g離心5 min沉淀細(xì)胞。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。

3. 碘化丙啶染色液的配制：

對于1個樣品，在0.5 mL染色緩沖液中加入25μl碘化丙啶染色液（20×）和10μl RNase A（50×），混勻待用。其它數(shù)量的樣品參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：

注：配制好的碘化丙啶染色液短時間內(nèi)可以4℃保存，當(dāng)日使用。

4. 染色：

每管細(xì)胞樣品中加入0.5ml碘化丙啶染色液，輕輕混勻重懸細(xì)胞沉淀，37℃避光孵育30分鐘，就可以進(jìn)行流式檢測，流式檢測*好在5h內(nèi)完成。

5. 流式檢測和分析：

用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。

注意事項(xiàng)：

1、  本試劑盒需要使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測；需自備PBS和70%乙醇。

2、  細(xì)胞需輕柔處理，盡量避免人為損傷細(xì)胞。

3、  為防止不同批次細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)時所處周期不同導(dǎo)致重復(fù)性差，可以在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行細(xì)胞的同步化處理。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞應(yīng)處于對數(shù)生長期，貼壁細(xì)胞一般在50～80%匯合度時收集為宜。

4、  400目篩網(wǎng)過濾是用來將粘在一起的細(xì)胞團(tuán)濾掉，留下單細(xì)胞，否則會出現(xiàn)人為的多倍體干擾。如果沒有條件過濾，請?jiān)谌旧皩⒓?xì)胞輕彈以分散，再進(jìn)行染色。

5、  熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

6、  碘化丙啶對人體有刺激性，操作碘化丙啶時，應(yīng)注意防護(hù)，保護(hù)眼睛、避免吸入。

7、  為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。。

保存條件：

-20℃避光保存，有效期兩年。